检测范围
LC-MS生物分析面向蛋白质、多肽、寡核苷酸及其修饰、杂质和体内浓度，采用完整分子量、酶解肽段、离子对色谱或靶向MRM路线。项目控制吸附、酶解、离子对试剂、基质效应和样品稳定性，交付序列覆盖、分子量与定量质控。
完整分子量
对多电荷包络去卷积，获得蛋白、多肽或寡核苷酸分子量及主要变体。
对象与条件
蛋白质和多肽的完整分子量、肽图、序列覆盖与修饰筛查。 寡核苷酸、siRNA和相关产品的分子量、杂质和降解物分析。 血浆、血清、尿液和组织中药物、肽或标志物的靶向定量。 生物制品生产中的宿主残留、过程杂质和批次一致性研究。 抗体、偶联物和核酸药物的连接、氧化、脱酰胺等结构变体。
需要注意的限制
大分子、寡核苷酸与生物分析结果报告对应实际样品、测点、量程和测量条件；整批评价按照约定取样方案、对照设置和判定依据执行 大分子、寡核苷酸与生物分析结果谱库匹配形成候选识别，标准品或互补技术用于确证；结果复核同步检查共洗脱、同分异构体、离子抑制、荧光背景、溶剂和前处理损失。 大分子、寡核苷酸与生物分析结果对应实际收到的样品、采用的液相色谱质谱 LC-MS条件和数据处理方法；样品或参数改变后按新条件复核可比性 仪器测试交付测量数据和技术说明；整批质量判定、产品认证、法定鉴定和监管事项按照相应程序实施
检测时需要注意什么
实施流程
1. 依据完整质量、序列、杂质或定量目标选择前处理、色谱和质谱平台；2. 制备低吸附样品，蛋白项目完成变性、还原、烷基化和受控酶解；3. 运行系统适用性、空白、参考品和质控，采集高分辨MS/MS或靶向MRM；4. 执行去卷积、数据库检索、假发现率、修饰定位或校准曲线审查；5. 汇总分子量、序列覆盖、变体或浓度，并保存原始文件与搜索参数
大分子吸附
低浓度蛋白、肽和核酸会吸附在普通塑料或玻璃表面，容器和添加剂经过回收验证。
肽段假发现率
数据库检索采用目标—诱饵等策略控制错误匹配，单肽和修饰位点另行审查。
离子对记忆
寡核苷酸常用离子对试剂，会改变LC-MS系统状态并产生记忆，采用专用流路和清洗。
去卷积结果
去卷积分子量依赖电荷分布、信噪和算法，报告同时保留原始m/z包络。
适用产品与样品
大分子、寡核苷酸与生物分析适用于以下产品、样品及技术问题。
适用产品和常见问题
- 蛋白质和多肽的完整分子量、肽图、序列覆盖与修饰筛查。
- 寡核苷酸、siRNA和相关产品的分子量、杂质和降解物分析。
- 血浆、血清、尿液和组织中药物、肽或标志物的靶向定量。
- 生物制品生产中的宿主残留、过程杂质和批次一致性研究。
- 抗体、偶联物和核酸药物的连接、氧化、脱酰胺等结构变体。
送样前需要准备什么
送样信息包括材质、形态、批次、保存条件、目标参数及制样要求。
- 01
蛋白与肽样低温保存，记录缓冲盐、浓度、还原烷基化、冻融和蛋白酶抑制。
- 02
寡核苷酸使用低吸附容器，注明序列、修饰、盐型、纯度和保存溶剂。
- 03
生物基质样按采血、抗凝、离心和冻结时限统一处理并记录溶血。
- 04
酶解项目配置空白、参考蛋白和过程质控，控制酶比、时间、pH和温度。
- 05
定量项目使用稳定同位素内标或适配替代基质，并验证吸附与稳定性。
蛋白与肽样低温保存，记录缓冲盐、浓度、还原烷基化、冻融和蛋白酶抑制。 寡核苷酸使用低吸附容器，注明序列、修饰、盐型、纯度和保存溶剂。 生物基质样按采血、抗凝、离心和冻结时限统一处理并记录溶血。 酶解项目配置空白、参考蛋白和过程质控，控制酶比、时间、pH和温度。 定量项目使用稳定同位素内标或适配替代基质，并验证吸附与稳定性。
原始质谱、去卷积谱和完整分子量。 肽段清单、序列覆盖和MS/MS证据。 修饰、寡核苷酸杂质或降解物表。 生物分析校准、内标、质控和样品浓度。 前处理、酶解、搜索参数和原始数据文件。
检测项目
完整分子量
对多电荷包络去卷积，获得蛋白、多肽或寡核苷酸分子量及主要变体。
肽图与序列覆盖
酶解后以LC-MS/MS鉴定肽段，映射序列并统计覆盖率。
翻译后修饰
定位氧化、脱酰胺、糖基化和其他质量偏移，并用碎片谱支持位点。
寡核苷酸杂质
分离n-1、n+1、未完全脱保护和降解物，结合准确质量归属。
生物基质定量
使用内标、基质校准和质控样测定药物或标志物浓度。
稳定性产物
在温度、光照或冻融条件下比较主峰、分子量和修饰变化。
检测方法和流程
检测标准和方法
以下是本页引用的标准与方法资料。具体项目是否适用、采用哪个版本及如何判定，需结合对象、条件和委托要求确认。
共 2 项
大分子、寡核苷酸与生物分析的方法选择、样品处理、仪器条件、质量控制和结果表达应与采用标准的适用范围保持一致。
GB/Z 35959-2018《液相色谱-质谱联用分析方法通则》可作为该分析方法的质量要求参考，项目按客户指定版本和实验室确认结果执行。
GB/Z 35959-2018—液相色谱-质谱联用分析方法通则大分子、寡核苷酸与生物分析的方法选择、样品处理、仪器条件、质量控制和结果表达应与采用标准的适用范围保持一致。
ISO 21253-1:2019《水中目标化合物 GC-MS/LC-MS 鉴定准则》可作为该分析方法的质量要求参考，项目按客户指定版本和实验室确认结果执行。
ISO 21253-1:2019—水中目标化合物 GC-MS/LC-MS 鉴定准则报告和检测数据
大分子、寡核苷酸与生物分析结果报告对应实际样品、测点、量程和测量条件；整批评价按照约定取样方案、对照设置和判定依据执行
大分子、寡核苷酸与生物分析结果谱库匹配形成候选识别，标准品或互补技术用于确证；结果复核同步检查共洗脱、同分异构体、离子抑制、荧光背景、溶剂和前处理损失。
大分子、寡核苷酸与生物分析结果对应实际收到的样品、采用的液相色谱质谱 LC-MS条件和数据处理方法；样品或参数改变后按新条件复核可比性
仪器测试交付测量数据和技术说明；整批质量判定、产品认证、法定鉴定和监管事项按照相应程序实施
常见问题
01完整分子量和肽图有什么区别？
完整质量显示整体分子量与大变体，肽图将蛋白酶解后提供序列和局部修饰信息。
02肽图覆盖率不到百分之百正常吗？
某些肽段过短、过长、疏水或离子化弱，覆盖率结合未覆盖区域和目标位点评价。
03MS/MS怎样定位蛋白修饰位点？
含修饰肽的碎片离子系列在特定残基处显示质量偏移，并结合定位概率审查。
04寡核苷酸为什么需要专用LC-MS流路？
离子对试剂容易吸附并影响其他方法，专用流路可控制记忆和交叉污染。
05低浓度多肽为什么容易丢失？
会吸附容器和管路或被蛋白酶降解，使用低吸附耗材、内标和稳定剂监控回收。
06生物基质定量为什么需要基质校准？
血浆或组织共提取物会产生离子抑制，基质标准和同位素内标用于校正。
07去卷积后的单一质量就是唯一结构吗？
相同整体质量可能对应不同修饰位置，需要肽图、碎片谱或其他结构证据区分。
08冻融会改变蛋白和寡核苷酸结果吗？
反复冻融会促使聚集或降解，稳定性研究确定允许次数并记录样品实际经历。